大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒操作步驟

   大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒

   貨號(hào)：BS-2877

   名稱：大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒

   規(guī)格：96T/48T

   基本信息：

   檢測(cè)原理?：主流采用?雙抗體夾心法?檢測(cè)，預(yù)包被AIF特異性抗體，樣本中AIF結(jié)合后，再加入HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體形成復(fù)合物，通過TMB顯色定量，產(chǎn)物顏色深淺與AIF濃度正相關(guān)。

   適用樣本?：大鼠血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液。

   核心性能（通用標(biāo)準(zhǔn)）?：檢測(cè)范圍通常為0.1ng/mL-8ng/mL，低檢測(cè)限≤0.05ng/mL；板內(nèi)變異系數(shù)CV<10%，板間CV<15%，特異性不與其他凋亡相關(guān)蛋白交叉反應(yīng)。

   操作步驟：

   實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?：試劑盒從2-8℃取出，室溫平衡30分鐘；20×濃縮洗滌液按1:19比例用蒸餾水稀釋；凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后做倍比稀釋，得到5-7個(gè)梯度濃度。

   加樣孵育?：設(shè)置空白、標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔加50μL對(duì)應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品，待測(cè)樣本孔先加40μL稀釋液再加10μL樣本（稀釋倍數(shù)5倍），封板后37℃孵育60分鐘。

   洗滌加酶?：洗滌5次拍干后，除空白孔每孔加100μLHRP標(biāo)記檢測(cè)抗體，重新封板37℃孵育60分鐘，再次洗滌5次拍干。

   顯色讀數(shù)?：每孔依次加50μL顯色劑A、50μL顯色劑B，37℃避光顯色15分鐘，加50μL終止液終止，15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀450nm波長讀數(shù)。

   結(jié)果計(jì)算?：四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣本OD值查出濃度后乘以稀釋倍數(shù)，得到終AIF實(shí)際濃度。

   使用注意事項(xiàng)：

   選型時(shí)優(yōu)先選擇?雙單抗配對(duì)?的試劑盒，特異性更好，能降低非特異性結(jié)合導(dǎo)致的背景偏高問題；若檢測(cè)細(xì)胞樣本，需確認(rèn)產(chǎn)品標(biāo)注支持細(xì)胞裂解液檢測(cè)。

   大鼠組織樣本需要提前預(yù)處理：組織塊勻漿后離心取上清，去除碎片沉淀后再檢測(cè)，避免堵孔或干擾顯色。

   實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置復(fù)孔和陰陽性對(duì)照，若標(biāo)準(zhǔn)曲線線性R2＜0.98，需要排除標(biāo)準(zhǔn)品降解或操作誤差，重新實(shí)驗(yàn)。

   注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

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